科罗拉多蜱传热

科罗拉多蜱传热(Colorado tick fever)也叫林热和山林蜱热．是在美国和加拿大洛矶山脉地区最早发现的常见的一种蜱传病毒性疾病，临床上类似一般感冒样症状，以双峰热和白细胞减少为特征。虽然大多数病例是自限性的，少数病人有脑炎症状，但也有更为严重并发症，甚至死亡。病原体在科罗拉多首先发现，又是蜱传播的．故名科拉多蜱传热

1 发现简史

l943年Legod Florio从美国西北地区发热病人血液中首先分离出一种新病毒。1944年又从安瓦蜱(Dermacentor andersoni)分离到同样病毒，并证明此种蜱可以传播给人．1972年德国分离到同样的病毒(Eyach株)，1976年美国加利福尼亚州分离的S6-14-03株病毒、法国分离的两个病毒株Ar877和Ar578．这些病毒原以为是呼肠孤病毒科环状病毒．以后查明这些病毒为双链RNA病毒，有l2个节段。1990年在德国召开的国际捕毒分类委员会根据这些特征划为一个新属一—— Colti属．以CTFv病毒为代表株。1993年在亚洲印度尼西亚分离11株(JKT株)病毒。

我国1981年先从北京三带喙库蚊分离出Colti(MI4 株)病毒．次年从云南医院发热病人血清106份、脑炎病人脑脊液5份分离出27株Cold(Banna株)病毒。 1985年从云南盂定家畜圈和竹林采集到10种蚊子分离出72株CTF病毒(MD株) 。1985年从海南省三带喙库蚁分离到HN131株．从麻翅库蚊分离到HN195株。1991年从甘肃武都县分离到1株病毒（WDC2株）．从甘肃文县分离到4株病毒(WX1、WX2、WX3和ACH株。 同年，从北京陶然亭公园丹离到2株(TRT2、TRT5)．从中国CDC传染病预防控制所院内分离到3株病毒(L Y1、LY2、LY3)。1999年从吉林省背点伊蚊分离到病毒(EN97—12、EN97—31)。从云南澜沧江下游地区蚊虫分离到10株Colti病毒.]，此外，还从新疆、山西、河南分离到Colti病毒。

2 病原学

呼肠孤病毒科分8个属．Coltivirus为其中的一个属，科罗拉多病毒为该属的代表种。科罗拉多病毒由微密核心和双层衣壳组成．呈二十面体对称，直径80m ．核衣壳直径为56 nm．衣壳内有32个壳粒．病毒核酸由12个片段的双链RNA组成，dsRNA基因片段的第十个(M6)、第十一个(s1)和第十二十(S2)的核苷酸序列长度分别为765、998和1 884 bp。在3个片段的九核苷和六核苷分别5’和3’非编码区(NCRs)发现有片段特异反转终点的重复。德国分离的Eyach株和美国分离的s6-14-03株氯基酸有55％～80‰同源性。

3 流行病学

3 1 地区分布

全球已发现有此病的国家有：美国、加拿大(哥伦比亚省和阿尔伯达省)、法国、德国、印度尼西亚、韩国和中国，美国有n 个州(科罗拉多、怀俄明、蒙大拿、爱达荷、犹他、南达科他、新墨西哥、加利福尼亚、俄勒冈、内华达、华盛顿)，在中国已有8个省、市(北京、云南、甘肃、海口、新疆、山西、河南、吉林)发现有人和动物中有感染。

在美国每年有数百例病人，但实际人数可能为其l0倍。90％的病人有暴露于蜱存在的环境的历史。年轻男性因户外活动多．发病率高。高危人群包括露营者、护林员、打猎者、电话查线员等。

发病有明显的季节性，3月到11月均有病人出现，但高峰期在5月下旬至7月上旬，与成虫蜱活动的高峰时期相一致。无症状感染者少，感染后获得持久的免疫力，但也有实验感染致两次发病的报告。

3.2 动物宿主以小哺乳动物为主要宿主．已从13种啮齿动物升离出病毒，还发现野兔、豪猪和牛带毒。将病毒接种新生小鼠、地鼠、金花鼠、鹿鼠、仓鼠、松鼠、罗候、豪猪可产生毒血症或死亡

3.3 传播媒介安德逊革蜱也叫洛矶山森林蜱(rocky mountain wood tick), 是主要的传播媒介。雌蜱产卵于枯叶下．幼虫孵出后找寻小型的哺乳动物如松鼠、花粟鼠等寄生，经几天后变成若虫，不进食进行冬眠。在春天另找小型哺乳动物寄生，经4～9天。若虫蜕皮变成成虫。成虫以大型哺乳动物作为宿主，如鹿、人。雌蜱发育6～13天开始产卵，产卵后不久即死亡。雄蜱在交配后仅存活几小时即死亡。Colti病毒可在若虫或成虫体内越冬.Colti病毒在未成熟的蜱和小的哺乳动物(主要是啮齿动物)之间传播。蜱的感染缓慢地从蚴虫到蝻再到成虫阶段。此外，还从西方革蜱和等翅革蜱分离出病毒。

人类感染是由于受病毒感染的成虫蜱叮咬而致。除山区人群易感外，偶尔感染的蜱尚可粘在衣物或其他露营的工具上带到远方，结果导致非流行区的人感染。在亚洲主要从10多种蚊分离出Colti．它们是：三带喙库蚁、白纹伊蚊、常型曼蚊(M r小”)、环纹按蚊、圆斑伊蚊、多节领蚊、迷走按蚊、环胫伊蚁、棕头库蚊、股点伊蚊等。

4 临床表现

4.1 潜伏期科罗拉多蜱热的潜状期大约是3～7天

4.2 急性期疾病往往是突然发生．伴有发热、寒战、肌肉和关节痛、头痛、嗜睡、眼眶痛、畏光和畏食．其他症状有咽痛，恶心，腹泻、便秘等。体温大约38. 3℃ ～39. 4℃，持续2～3 天体温下降，接着缓解2～7天．然后复发出现发热2～3天，即出现双波热，在确诊为科罗拉多蜱热病例中一半病人可见双波热，约20％的病例有呕吐和腹痛，5%～12%的确诊病例可观察到皮疹。一些病例出现嗜睡．颈强直等脑炎症状和无菌性脑膜炎，10岁以下儿童病情常较严重，严重型有中枢神经系统症状和出血。

43 恢复期 这个时期的常见症状是不适和虚弱，偶有肌痛，关节痛。恢复期7～14天，50%病例可长达几周至几个月。血液检查常见中性粒细胞减少、血小板减少和轻微贫血；如侵犯中枢神经系统、脑脊液蛋白增加、细胞增多，多数是淋巴细胞。

4.4 并发症和后遗症10岁以下儿童可并发脑炎、脑膜炎和脑膜脑炎。出血以皮肤瘀点、紫癜多见．可能与血小板减少有关，胃肠道出血可能与DIC有关。其他不常见的并发症包括肝炎、心包炎心肌炎、附睾一睾丸炎、非典型肺炎等。这些并发症出现较晚，可能与免疫病理有关。

4.5 鉴别诊断临床诊断需依赖流行病学依据，如有流行区野外暴露史．临床上表现为非特异性流感样症状、双峰热型及白细胞减少，应首先考虑Colti病毒，结合实验室检查可作出诊断。临床上应与流感、麻疹、伤寒、斑疹伤寒、登革热等进行鉴别。有户外活动者应与钩端螺旋体病、蜱传回归热、洛矶山斑点热及兔热病鉴别。必要时可借助血情学试验、分子生物学检查和病毒分离进行鉴别。

5 实验室检查

5.1 血象及骨髓象 所有的血液成分均可能减少。外周血白细胞计数可降到1～4×109L。呈现严重的白细胞减少是该病的特点。在第二次发热起始时白细胞减至最低水平．并可见中性粒细胞内中毒颗粒及异型淋巴细胞．分类计数通常显示相对的淋巴细胞增多，尚可出现未成熟的中性粒细胞。白细胞计数低下可持续至临床症状恢复后7天。可有血小板减少。骨髓检查可见中性粒细胞系统成熟障碍。

5.2 电镜观察云南92—4经负染电镜观察，毒粒形态为圆形．直径约为(87. O0+ 0. 05)nm，病毒颗粒的外层可表面突起。

5.3 病毒分离病程第1周即可从血液、红细胞、网状细胞及骨髓中分离出colti 病毒，病程第2～3周阳性率最高。分离出的病毒可用新生小鼠进行腹腔注射或脑内注射．或在Veto、C6/36、BHK-21、Vero传代细胞和鸡胚原代细胞中，病毒不引起细胞病变。脑内或皮下注射2～4d龄乳小白鼠和3周龄小白鼠均不出现明显的症状，但病毒在乳鼠脑内能繁．且3周小白鼠脑内注射病毒后能诱生高滴度(>l：280)抗体。

5.4 血清学检验用于Colti病毒诊断的血清学试验，包括血凝抑制试验、ELISA、补体结合试验、间接免疫荧光试验和中和抗体法等，对急性期和恢复期双份血清进行测定，对Colti病毒的诊断和流行病学调查均有价值。

直接免疫荧光染色试验可在红细胞内检出病毒抗原．有助于早期诊断。

用ELISA在感染急性期患者血情中检测针对合成病毒肽的特异性IgM抗体有助于早期诊断．

5.5 快速微最中和试验法

5.5.1细胞 白纹伊蚊细胞C6／36株，按Igarashi法培摹；

5.5.2病毒 披膜病毒科甲属病毒：马雅罗(MAY)、辛德比斯(SIN)、GET、SAG；黄病毒科病毒：乙型脑炎病毒(A2株)，登革2型病毒。所有病毒株首先在乳鼠脑内传一代，然后在C6／36细胞上增殖一代。收取感染的细胞培养渍作为病毒原液保存于一80℃备用。

5.5.3免疫腹水和酶标SPA 自备

5.5.4稀释液 病毒原液和免疫腹水用基础培养液稀释，EIA中的抗体和酶标SPA均用含0.1%白明胶的PBS-吐温20溶液（PH7.4）稀释。

5.5.5中和试验 采用稀释病毒、固定抗体法（也可用稀释抗体、固定病毒法)。 每次试验设有病毒对照，血清阴性对照组，正常细胞对照。先将C6／36细胞悬液（大约5.0*106细胞／孔）加入无菌40孔平底组织培养板中，每孔0.1m1．置28℃ 干燥缸内培养以形成单层。次日，在微量滴定板上将病毒原液从10-1 至10-8作一系列10倍稀释。然后，每个稀释度与等量抗体(80μl)混合。此混合物在室温(或37℃)中和1 h后接种30μl到细胞单层上，28℃培养3d，移去维持液，用PH7.4PBS轻洗细胞单层1次，用10%甲醛在室温固定30min，再用PBS，洗1次便可作EIA染色，结果可用肉眼或检测仪判断，按Reed-Muench法计算TCID50,如当天不作染色，4℃可保存1周，-20℃可保存3个月。用蛋白印迹分析，可以在所有试验血清中检测到针对一种38*103病毒蛋白的抗体，这种方法可以在ELISA阴性血清中检测到Colti病毒抗体。

5.6 分子生物学检测感染的早期症状很难与一些其他的病原体特别是发疹伤寒等的病原体相区别。由于各种抗体在后期出现，因此在感染的急性期血清学试验通常不能提供Colti病毒感染的证据。在这里我们报告一种试验能对这种疾病急性期进行检测并用于临床诊断。首先制作Colti（Florio）病毒的S2片段的寡核苷酸引物，用于扩增DNA的一个528bp片段，通过反转录PCR从双链Colti病毒RNA摸板上转录。当在琼脂糖凝胶上分析时，发现从16个Colti病毒分离株产生的RNAs结果相似。这些结果可与和他们的抗原有相关的Eyach，S6-14-03和T5-2092及其他的科罗拉多蜱传热病毒和一种环状病毒区别开来，但不与抗原性清楚的Colti病毒相关的分离株720896相区别。从老鼠模型的全血样品示范了这个方法，而且Colti病毒成功地从病人症状开始直到第8天的血清中检测到。为了寻找适当的医学支持，在Colti病毒感染早期诊断中或确定Colti病毒作为感染原，反转录PCR是一个很有希望的工具。

5.7 ELISA试验结果显示，6号等10株12节段RNA病毒均与单抗呈明显阳性反应，除93-75单抗免疫荧光试验阳性，而61-3等9株，10节段RNA病毒免疫荧光反应阴性。云南151-1与乙型脑炎病毒A2免疫腹水呈明显免疫荧光反应阳性。云南92-4病毒在C6／36或BHK-21细胞培养制备的抗原片，均与虫媒病毒布尼亚组特异免疫腹水及该组的Batai病毒抗体呈阳性反应。

6 预防控制措施

6．1 疫苗 美国曾制备甲醛灭活纯化的Colti病毒乳鼠脑疫苗。疫苗接种志愿者多数人中和抗体至少持续5年。

6．2 预防蜱的叮咬 在流行区预防科罗拉多蜱传热最好方法是教育危险人群不被蜱叮咬，如野营者、徒步旅行者和户外职业的人群应避免被蜱叮咬。人如进入有蜱的地区应穿适当的衣服，例如浅颜色的衣服可防止蜱叮咬。带有裤脚翻边围绕到踝部的长裤子有助于减少与蜱的接触。驱蜱药或沾有驱蜱药的衣服能有效防蜱。可用扑灭司林(Permethrin) 喷洒到衣服、鞋和工具上，驱虫剂含有3O％以下的间苯甲酰二乙胺(diethyltoluamide)，应该仅应用在暴露的皮肤上，避免用在儿童的脸和手上，以免被摄入。如发现蜱叮咬，应立即将其拖出，防止虫体断裂而使其口部残留于人体内．一旦残留，可用消毒的针尖挑出，用酒精或指甲油有助于把蜱拨出。